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DNA pull down實驗技術

更新時間:2021-09-23點擊次數:3800

DNA pull down實驗技術

1. 實驗原理

DNA pull down體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術將生物素標記的DNA 片段結合在鏈霉親和素磁珠上,再與細胞核蛋白孵育,純化出與DNA 片段互作的蛋白,洗滌洗脫得到的蛋白產物,做Western blot檢測特定蛋白是否與靶DNA 片段結合;做質譜鑒定即可篩選出與DNA 片段可能互作的蛋白信息(如:轉錄因子、組蛋白等)。

生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用;其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此用生物素標記核酸后,可以純化出與該核酸結合的各種生物大分子復合物。

DNA pull-down.png

2. 實驗流程

DNA pull down.png

1)探針設計及標記:針對靶標區域設計特異性DNA探針,探針經過脫硫生物素標記,跟偶聯在磁珠上的鏈霉親和素結合;

2)Pull down:細胞核提取物與磁珠-DNA探針孵育,靶DNA可以和DNA探針特異性結合,純化出與靶DNA 片段結合的蛋白復合體,經過洗滌可以將非特異性結合蛋白質去除;最后,洗脫得到與靶DNA結合的蛋白質復合物;

3)互作蛋白質鑒定:再經過Western Blot或質譜(MS)鑒定蛋白質。

3. 技術服務

1)DNA探針的設計與合成;

2)細胞培養與核蛋白提?。?/span>

3)Pull down捕獲互作蛋白;

4)Western blot驗證;

4)MS鑒定可能的互作蛋白。

4. 交付結果

1)客觀公正的實驗原始數據和分析結果;

2)提供詳細、完整的實驗報告。


上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學領域提供相關試劑產品和服務的生物高科技企業,坐落于上海聚科生物產業園。公司提供種類齊全的細胞系和多種原代細胞、質量穩定的細胞培養試劑產品、成熟高效的技術服務。本著“守正創新,科學嚴謹"的理念,我們以高標準塑造行業品牌,以全新視野構建現代企業,勇于探索和創新。公司業務范圍涉及全國各省市自治區,與國內多家醫院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關系,贏得了良好的市場聲譽和廣泛的認可,我們保證將繼續為廣大科研用戶提供專業、高效、優質的產品及服務!

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